在鑒定ELISA法抗體偶聯產物的活性時,流式細胞儀法與ELISA法的主要區別體現在檢測原理、樣本形式和應用場景上。以下是具體對比:
檢測原理
?ELISA法?:通過將可溶性抗原包被在96孔板中,待測抗體與酶標抗體競爭結合抗原,通過檢測吸光值變化(與待測抗體濃度呈負相關)來評價抗原結合能力?。
?流式細胞儀法?:原理與ELISA類似,但將可溶性抗原替換為攜帶抗原的細胞,通過流式細胞儀檢測細胞陽性率或熒光強度,分析待測抗體的結合情況?。
樣本形式
?ELISA法?:依賴可溶性抗原,需純化抗原并包被在固相載體上?。
?流式細胞儀法?:使用細胞作為抗原載體,細胞表面抗原的空間結構更接近體內自然狀態,結果更貼近實際生理環境?。
應用場景
?ELISA法?:操作簡單、耐用性好,適合常規定量分析,但需標準品平行操作以減少誤差?。
?流式細胞儀法?:適用于難以獲得可溶性抗原的抗體檢測,可同時分析細胞亞群,并能結合親和力測定(如計算平衡解離常數KD)?。
技術優勢
?ELISA法?:成本較低,適合大規模樣本篩查?。
?流式細胞儀法?:可區分細胞來源(如特定細胞亞群),提供更復雜的多參數分析?。
(注:上圖展示兩種方法在抗原結合檢測中的流程差異,如ELISA的固相競爭與流式的細胞表面檢測。)
總結
選擇方法時需根據實驗需求:若需快速定量且抗原易得,優先選ELISA;若需模擬體內環境或分析細胞特異性,流式細胞儀更優?。
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