感覺態細胞的制備：
注①：有化轉和電轉兩種。
注②：制備具體步驟因人而異。
將處于對數生長期的大腸桿菌（細胞的感受態一般出現在對數生長期，新鮮幼嫩的細胞是制備感覺態細胞和進行成功轉化的關鍵。對數生長前期的細菌可通過測定培養液的OD600控制，所以要嚴密監測細菌的OD值）置于經低溫預處理的低滲CaCl2溶液（CaCl2和水需是較高純度的）中，在低滲CaCl2溶液中，細胞會膨脹，同時Ca2+還會使磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，細胞膜通透性發生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復合物。（整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿高壓滅菌處理）添加其它的二價金屬離子、DMSO或還原劑等物質處理，提高轉化率。
感覺態細胞的轉化注意事項：
連接反應產物在轉化之前在70ºC熱滅活15min，連接產物在熱滅活后無需純化可直接使用；
DNA樣本必須是溶解于ddH2O或TEbuffer的純化樣本。電轉化樣本中如果存在鹽離子會導致電轉過程中的高壓電弧，從而引起細胞和DNA的損失；
微量離心管和電轉杯在使用前必須冰?。?/div>
在使用之前必須在冰上解凍；
為了得到高效的轉化效率，請使用試劑盒中的重懸電轉后的細胞，如果使用TB或其它培養基會降低感受態的轉化效率；
電轉后的細胞可以在LB或其它常規培養基上涂板。
滬ICP備17029297號-5 管理登陸 技術支持：化工儀器網 GoogleSitemap